<血源乙型肝炎疫苗制造及检定规程
本品系由无症状 1 血源 1<.1 对献血员的要求 1.1.1 献血员应为20~50岁无症状HBsAg携带者,其肝功能应无显著异常,并稳定。对献血员的其他要求按《原料血浆采集(单采血浆术)规程》执行。 1<.1<.2个月接种过活疫苗,<1年内接种过狂犬病疫苗者,均不采血。 1.1.3 必要时以免疫扩散法(ID)测定HBsAg亚型。血源应以ad亚型为主,可有少量ay亚型。 1.2 单份血浆检查 1.2.1 无菌试验 按《生物制品无菌试验规程》进行。 1.2.2 HbsAg测定 用对流电泳法测定,HBsAg滴度应≥1∶8,或用反向血凝法(RPHA)测定,滴度应≥1∶1024。 1.3 混合血浆检查 1.3.1 支原体检查 按《生物制品无菌试验规程》进行。 1.3.2 取样接种孔雀绿培养基,35~37℃培养28天,结果应为阴性。 1.3.3 外源病毒检查 用Vero细胞和人二倍体细胞各3瓶,每瓶容量为10~15ml,各接种0.2ml样品,35~37℃培养10天,应无病变出现。用0.2%~0.5%鸡与豚鼠红细胞等量混合后于<37℃吸附<1小时,测定血吸附反应,应均为阴性。 2 抗原的浓缩和变化 2<.1 血浆脱纤维 于血浆中加入氯化钙溶液,使之脱纤维。 2.2 硫酸铵沉淀 于血清中加入硫酸铵饱和溶液,或用固体硫酸铵,使最后达到适宜的饱和度,沉淀HBsA. 2.3 超离心纯化 溴化钾等密度区带离心2~3次,每次离心后分部收样,根据紫外监测峰及密度测定,合并合格的样品,经超滤去盐浓缩。蔗糖速率区带离心<1~<2次,分离出 3 灭活 3<.1 胃酶处理 将HBsAg悬液加入适量胃酶,置35~37℃处理4~5小时,最后超滤去胃酶。 3.2 尿素处理 于HBsAg悬液中加尿素至4~8mol/L置37℃处理4~5小时,超滤去尿素。亦可不用尿素处理。 3.3 福尔马林灭活 于 4 稀释与吸附 已灭活的疫苗原液经除菌过滤后,根据 5< 半成品检定 5<.1 总蛋白含量测定 用Lowry法测定,使用检定所提供的标准品。 5.2 HBsAg含量测定 按总蛋白含量将样品稀释至不同稀释度,用RIA或火箭电泳法测定,使用检定所提供的标准品,HBsAg含量应在90%以上。 5<.3 电镜检查 取每台离心机每次蔗糖离心后的样品,制作5个铜网,在60000倍电镜下,每个铜网观察6个视野,结果应主要为22nm球形颗粒,未见Dane颗粒为合格。有可疑Dane颗粒者应以加倍视野数检查。 5.4 残留杂蛋白检查 5.4.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 浓缩胶浓度为4%,分离胶为7.5%,加10μgHBsAg样品和适量的人血清白蛋白进行电泳,银染,试验样品应不出现明显杂蛋白带。 5.4.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法 HBsAg样品经SDS处理后在7.0%浓缩胶和15%分离胶中加入5μg进行电泳,结果在分离胶中应主要存在22000及28000分子量带,应不出现明显的杂蛋白带。 5.5 HBV DNA检查 用 5.6 无菌试验 按《生物制品无菌试验规程》进行。 6 分装 每支安瓿分装<1.0ml, 7 成品检定 7<.1 无菌试验 按《生物制品无菌试验规程》进行。 7.2 安全试验 每亚批疫苗皮下注射体重14~16g小白鼠,每只0.5ml,注射后第3天和第<7天各观察一次,允许皮下有硬结,但应健存。 7.3 化学检定 按《生物制品化学规定规程》进行。 7.3.1 pH值测定 应为5.5~6.8。 7.3.2 游离甲醛测定 应含游离甲醛,但含量应≤0.01%。 7.3.3 氢氧化铝含量测定 每ml应不超过1.25mg。 7.3.4 氯化钠含量测定 应为0.8~0.95%。 7<.3<.5 硫柳汞含量测定 不应超过0.01%。 7.4 效力和鉴别试验 将疫苗4倍递增稀释,每个稀释度接种BALB/cH2d或NIHq型雌性小白鼠20只,每只腹腔注射1.0ml,4~6周后采血,以RIA法测定抗-HBs,计算小白鼠ED50值与参比苗ED50值,结果以检品ED50值/参比ED50值,其比值≥1为合格。 7.5 抗-HBc检测 每批用6只体重为300~350g同性豚鼠,每只腹部皮下注射疫苗0.5ml,间隔一个月免疫第2次,之后一个月心脏采血,用RIA法检测免疫前后血清,结果抗-HBc应阴性,否则应重试。 7.6 人体免疫观察及标准 每年度生产的头<3批疫苗或前、中、后各一批疫苗进行人体免疫观察,观察对象为小学生或学龄前儿童,按<0、<1、<2个月程序每批至少接种<20人,每人于上臂三角肌肌内注射<1.0ml,于<3针接种后一个月采血,用 8 保存与效期 保存于<2~<8℃暗处,不得冻结。自检定合格之日起效期为<2年。 血源乙型肝炎疫苗使用说明书 本品系由无症状 接种对象 乙型肝炎易感者(表面抗原阴性,转氨酶正常)。主要用于婴幼儿。 用法 1<.上臂三角肌肌内注射。 2.免疫程序均按0、1、6个月各注射一针。新生儿接种时,0系指第一针免疫,免疫应于出生后24小时内完成,然后间隔1个月及6个月再各注射一针。 3.孕妇不进行乙肝感染指标检测时,所有新生儿均注射30μg、10μg、10μg/支疫苗3针。 4.孕妇进行乙肝感染指标检测时,乙肝表面抗原(特别是e抗原)阳性母亲的新生儿,注射30μg/支疫苗3针。与抗乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)联合使用,效果更佳。0时先注射HBIG一针,2~4周后开始注射疫苗。乙肝表面抗原阴性母亲的新生儿,注射30μg、10μg、10μg/支疫苗3针。 5.其他高成人群,如肾透析,以及其他职业性乙肝密切接触者,注射30μg/支疫苗3针。 6<.一般易感者(包括婴幼儿、儿童及成人)注射<10μ 禁忌 患有肝炎、发热、急性或慢性严重疾病,或有过敏史者。 注意事项 1<.本疫苗在注射前要充分摇匀。 2.如安瓿破裂,疫苗变质有摇不散的块状物不得使用。 装量 本疫苗分为<10μ 保存 保存于<2~<8℃暗处,严防冻结。