七参连湿疹膏对特应性皮炎模型豚鼠的改善作用研究(3)
2.3 皮肤组织形态学观察末次用药24 h后,处死豚鼠,取致敏侧(正常对照组取同侧)皮肤组织适量,用10%中性福尔马林溶液固定24 h后,切片(厚度约4 μm),经HE染色后,使用光学显微镜观察各组豚鼠皮肤组织的病理学变化和炎症细胞浸润情况[镜下炎症细胞(主要是淋巴细胞和单核细胞)呈点状,以蓝色为主。其中,淋巴细胞小而圆,胞浆稀少,核呈紫蓝色;单核细胞体积大,胞浆淡红,核卵呈圆形、深蓝色]。
2.4 皮肤组织角质形成细胞凋亡情况检测
采用TUNEL法检测。取各组豚鼠致敏侧(正常对照组取同侧)皮肤组织适量,用10%中性福尔马林溶液固定24 h后,切片(厚度约5 ?m),经常规贴片、烤片后,行常规脱蜡、水化,用TUNEL试剂盒染色,再用DAB显色,以水终止显色反应,行常规乙醇梯度脱水、二甲苯透明,中性树胶封片。于光学显微镜下观察并拍照,直接计数视野中TUNEL染色阳性细胞数[呈深棕褐色的细胞即为凋亡阳性角质形成细胞(胞核着色,呈圆形)]。每个组织切片取4个视野分别进行计数后,取均值作为该切片的TUNEL阳性细胞数;每个样本取3张组织切片进行上述计数后,取均值作为该样本的TUNEL阳性细胞数。
2.5 皮肤组织中IFN-γ水平检测
采用ELISA法检测。取各组豚鼠致敏侧(正常对照组取同侧)皮肤组织适量 ......
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