2.6 细胞中53BP1焦点簇数量的检测

    采用免疫荧光法检测。取无菌的12孔板，每孔加入20 mm×20 mm已灭菌盖玻片，用紫外线照射1 h。取对数生长期BMSCs，用0.25%胰蛋白酶消化后，以专用培养基制成单细胞悬液，按2 mL/孔(即4×103个/mL)接种于上述12孔板中，将细胞随机分为空白组、辐射组、黄芪多糖组、黄芪皂苷组、黄芪黄酮组，每组设3个复孔。按“2.5”项下方法加药、预干预、辐射、继续干预适宜时间(参考“2.4”项下结果初设继续干预时间，再根据检测结果细分干预时间，即继续干预0.5、2、12、24 h)。弃去培养基，细胞用4 ℃甲醇固定20 min后，于0.5%Triton-X 100试剂孵育10 min;用5%脱脂牛奶封闭1 h后，加入53BP1抗(稀释比例为1 ∶ 500)，室温孵育2 h，以PBST溶液洗涤3次，再加入相应二抗(稀释比例为1 ∶ 1 000)，室温孵育1 h，以PBST溶液洗涤5次。细胞核以DAPI进行复染并制片，使用荧光显微镜观察并拍照，每个样品计数100个细胞并计算其中53BP1焦点簇数量(53BP1蛋白显红色荧光)。

    2.7 统计学方法

    采用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析。采用Shapiro-Wilk检验进行正态性检验。计量资料符合正态分布者以x±s表示，不符合正态分布者以M(P25 ......