莪术醇对斑马鱼的血管生成活性及作用机制研究
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[摘要]目的：初步研究莪术醇促进血管生成的活性及作用机制，为临床用药提供依据。方法：采用斑马鱼生物模式，观察莪术醇对斑马鱼胚胎体节间血管生长、成鱼剪尾后血管再生和仔鱼切尾后组织再生情况。采用相对荧光定量PCR法检测仔鱼切尾后体内血管内皮生长因子(VEGFA)及受体(VEGFR2)基因的表达。结果：莪术醇能使斑马鱼胚胎体节间血管侧生出新的血管，使成鱼剪尾后血管再生加快，使仔鱼切尾后尾部再生加快。且莪术醇能提高仔鱼体内VEGFA及VEGFR2基因的表达量，促进仔鱼切尾后的尾部再生。结论：莪术醇能促进斑马鱼的血管生成，提高仔鱼切尾后体内VEGFA及VEGFR2基因的表达量，促进尾部再生。
[关键词]斑马鱼；莪术醇；血管生成；VEGFA；VEGFR2
[稿件编号]20110607006
[基金项目]浙江省中医管理局重大科研项目(2008ZA016)
[通信作者]*董建勇，教授，Email：jianyd163@163.com
[作者简介]田丽莉，硕士研究生，Email：lily777@163.com
血管生成不足主要表现为无法满足机体组织生长或修复需要。研究表明，血管内皮细胞生长因子(VEGF)是最重要的血管生成调控因子之一[1]。但外源性促血管生长因子与基因治疗，存在表达是否可靠、生物利用率低、易出现副作用等问题。因此，研究新的促进血管生成药物意义重大。莪术是常用活血化瘀类中药，莪术醇为其主要成分之一，是否具促血管生成活性，国内外尚未见报道。目前，促血管生成药物的筛选模型多为体外实验，其结果需借助整体模型验证和评价。近年来，flkGFP斑马鱼已成为研究血管生成独特的模式生物[2]。它是一种在血管内皮细胞表面表达GFP的转基因动物，荧光显微镜下清晰可见血管，且与人类的亲缘关系较近[3]。斑马鱼是一种具有高通量、操作相对简单、筛选周期短、样品用量少和整体实验等特点的药物筛选模型[4]。本研究采用斑马鱼生物模式，对莪术醇促进血管生成活性及机制进行初步研究，为临床用药提供依据。
1材料
1.1试药莪术醇由本实验室从莪术油中分离提取，经色谱鉴定，纯度为99.6%。
1.2动物无病原体(FLIeGFP，AB品系)斑马鱼，由温州医学院水域科学与环境生态研究所提供。斑马鱼饲养于全封闭循环系统，养殖和繁殖均参照Zebrafish Book标准，鱼房内光照/黑暗比为14 h/10 h，室内温度26 ℃，水温28 ℃，pH 6.8～7.5，电导率850～900，其各项水质指标均合要求。
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