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编号:12641777
太子参药材的快速分子鉴定(2)
http://www.100md.com 2014年10月1日 中国中药杂志 2014年第19期
     本实验根据引物和扩增产物的Tm及长度设置PCR扩增反应体系与扩增程序,分别用引物Tzs-1F/Tzs-1R,Tzs-2F/Tzs-2R,Tzs-3F/Tzs-3R对太子参和易混品种进行特异性扩增验证,见表2。取6 μL PCR扩增产物加入含EB的1.2%琼脂糖凝胶中,80 V稳定电压电泳1 h,紫外凝胶成像系统观察。

    2.3 PCR扩增反应条件优化 利用太子参特异性引物Tzs-2F/Tzs-2R进行PCR扩增反应,方法见表2。取6 μL PCR扩增产物加入含EB的1.2%琼脂糖凝胶中,80 V稳定电压电泳1 h,紫外凝胶成像系统观察。在剩余扩增产物中加入1 μL 100×SYBR Green I,混匀后于365 nm紫外光下观察。为获取最佳扩增条件,分别对PCR扩增程序和反应体系进行优化①退火延伸温度:48,50,52,54,56,58,60,62,64,66,68 ℃;②退火延伸时间:5,10,15,20 s;③循环次数:25,30,35,40次;④引物用量:5,10,15 pmol;⑤DNA Taq聚合酶预混液的用量:3.5,4.5,5.5 ......
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