绵枣儿中高异黄酮和二苯乙烯类化合物(1)
[摘要]绵枣儿来源于风信子科植物绵枣儿Scilla scilloides (Lindl.) Druce的鳞茎。本研究采用HPD100大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱色谱和半制备HPLC等方法，从采自河南信阳的绵枣儿中分离出17个化合物；根据化合物的理化性质和波谱数据，分别鉴定为2-羟基-7-甲氧基绵枣儿素(1)，绵枣儿素(2)，5，7-dihydroxy-3′，4′-dimethoxyspiro{2H-1-benzopyran-7′-bicyclo[4.2.0]octa [1，3，5]-trien}-4-one(3)，socialinone(4)，4-甲基白藜芦醇(5)，(E)-白藜芦醇(6)，scillavone A(7)，3，9-dihydroeucomnalin(8)，3-(3-羟基-4-甲氧基苄基)-5，7-二羟基苯并二氢吡喃-4-酮(9)，(3R)-5，7，3′-trihydroxy-4′-methoxyspiro{2H-1-benzopyran-7′-bicyclo[4，2，0]octa[1，3，5]-trien}-4-one(10)，scillabene A(11)，2-羟基绵枣儿素(12)，3-(4-羟基苄基)-5，7-二羟基苯并二氢吡喃-4-酮(13)，3-(4-羟基亚苄基)-5，7-二羟基苯并二氢吡喃-4-酮(14)，3-(4-羟基苄基)-5-羟基-7，8-二甲氧基苯并二氢吡喃-4-酮(15)，3-(4-羟基苄基)-5-羟基-6，7-二甲氧基苯并二氢吡喃-4-酮(16) ，3-(4-羟基苄基)-5，8-二羟基-7-甲氧基苯并二氢吡喃-4-酮(17)，其中化合物3，4，6，9，13 和15～17为首次从绵枣儿植物中分离得到。
, 百拇医药
[关键词]绵枣儿；高异黄酮；二苯乙烯
绵枣儿Scilla scilloides (Lindl.) Druce为风信子科绵枣儿属多年生草本植物，在我国主要分布于东北、华北、华中以及四川(木里)、云南( 洱源、中甸)、广东(北部)、江西、江苏、浙江和台湾。生于海拔2 600米以下的山坡、草地、路旁或林缘，也分布于朝鲜、日本和苏联[1]。其鳞茎或带根的全草作为绵枣儿入药始载于《救荒本草》，又名石枣儿，天蒜，地兰，山大蒜，鲜白头，地枣、独叶芹、催生草、药狗蒜，老鸭葱等。《全国中草药汇编》和《中华本草》均描述绵枣儿味甘、苦，性寒，有小毒，具有活血止痛、解毒消肿、强心利尿的功效，用于跌打损伤，腰腿疼痛，筋骨痛，心脏病水肿；外用治痈疽，乳腺炎等[2，3]。已有研究表明绵枣儿含三萜及三萜皂苷、高异黄酮、生物碱和二苯乙烯等多种化学成分，生物活性具有多样性，主要表现在抗菌、抗炎、抗氧化等方面[4]。鉴于绵枣儿在我国分布范围广、资源丰富，药用历史悠久，在河南某些产区有食用和酿酒的习惯，而文献记载“绵枣儿有毒，应用不当会导致夹竹桃样中毒症状”[2]。因此，对绵枣儿开展深入的化学成分研究，对于阐明其药效物质基础，实现植物资源的有效开发与利用，保证临床用药安全具有重要意义。本研究采用各种柱色谱技术，从采自河南信阳的绵枣儿鳞茎95%乙醇提取物中分离出17个化合物；基于化合物的理化性质和波谱数据，鉴定了他们的结构；其中化合物3，4，6，9，13和15～17为首次从绵枣儿植物中分离得到。
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1 仪器与试药
Bruker AVIII-600核磁共振仪，Alltech 426 UV 2000 高效液相色谱仪，岛津LC-20A高效液相色谱仪，Aglient 1200-6130 series LC/MSD 液质联用仪，SHZ-D循环水式真空泵，旋转蒸发仪。
柱色谱硅胶(100～200，200～300，300～400目，青岛海洋化工厂)，柱色谱用ODS填料(Merck，German)，薄层色谱硅胶GF254(青岛海洋化工厂)，预制薄层板GF254(烟台江友硅胶开发有限公司或青岛海洋化工厂)， Sephadex LH-20(GE Healthcare，Sweden)，HPD-100型大孔树脂(河北沧州宝恩化工有限公司)，Macherey-Nagel Nucleosil C18 HPLC半制备柱(10 mm×250 mm，5 μm)，氘代试剂DMSO，CD3OD和CDCl3(Cambridge Isotope Laboratories，USA)；显色剂2%硫酸香草醛溶液，色谱甲醇和乙腈(Fisher)，其他试剂均为分析纯(北京化工厂)。
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绵枣儿于2011年11月采自河南省信阳市浉河区五星乡龟山亭风景区，经河南中医学院药学院代丽萍副教授鉴定为绵枣儿属植物绵枣儿S. scilloides的鳞茎。
2 提取与分离
新鲜的绵枣儿鳞茎10 kg，洗净，捣碎，依次用95%，95%，70%和50%乙醇加热回流提取4次(10倍，10倍，8倍，6倍)，1 h/次，提取液纱布过滤，滤液回收溶剂，得95%，70%和50%乙醇提取物400 g，730 g和250 g。取95%乙醇提取物用适量水混悬，乙酸乙酯萃取，水层上HPD-100树脂柱，分别用水，30%，50%和95%乙醇(各3倍柱体积)进行洗脱，回收溶剂得各部位的浸膏分别为200 g，55 g，6 g和29 g。经初步的TLC和HPLC分析，乙酸乙酯萃取部位和大孔树脂柱95%乙醇洗脱部位主成分相似，将两者合并，共44 g，进行硅胶柱色谱分离，分别用石油醚-丙酮(4∶1，1∶1)、氯仿-甲醇(20∶1，9∶1，3∶1)、氯仿-甲醇-水(15∶8∶1，6∶4∶1)梯度洗脱，共得到15个流分(Fr.1～15)。Fr.3经Sephadex LH-20柱分离，甲醇洗脱，得到Fr.3.1～Fr.3.3共3个流分；Fr.3.3(250 mg)经半制备HPLC纯化，流动相为乙腈-0.3%乙酸水(40∶60，3 mL·min-1)，得到化合物1(97 mg，tR 21.8 min )和2(33 mg，tR 23.6 min)；Fr.3.2(136 mg)经半制备HPLC纯化，流动相为乙腈-0.3%乙酸水(40∶60，3 mL·min-1)，得到化合物3(30 mg，tR 19.9 min)和4(3 mg，tR 16.8 min)。Fr.4经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇(60∶1，30∶1，10∶1)洗脱，得到7个流分Fr.4.1-Fr.4.7； Fr.4.7(70 mg)经半制备HPLC纯化，流动相为乙腈-0.3%乙酸水(27∶73，3 mL·min-1)，得到化合物5(30 mg，tR 31.3 min)和6 (20 mg，tR 18.7 min)；Fr.4.2(780 mg)经Sephadex LH-20柱(甲醇洗脱)以及半制备HPLC纯化，流动相为甲醇-水(51∶49，3 mL·min-1)，得到化合物7(6 mg，tR 22.5 min)， 8(99 mg，tR 30.3 min)，9(20 mg，tR 39.6 min)，10(20 mg，tR 25.3 min)和17(10 mg，tR 18.9 min)；Fr.4.4(600 mg)经Sephadex LH-20柱(甲醇洗脱)以及半制备HPLC纯化，流动相为甲醇-水(52∶48，3 mL·min-1)，得到化合物11(18 mg，tR 11.3 min)，12(10 mg，tR 17.6 min)，13(24 mg，tR 24.2 min)和14(20 mg，tR 52.5 min)；Fr.4.1(230 mg)经Sephadex LH-20(甲醇洗脱)以及半制备HPLC纯化，流动相为乙腈-水(36∶64，3 mL·min-1)，得到化合物15(20 mg， tR 20.1 min)和16(22 mg， tR 21.1 min)。, 百拇医药(王延敏 樊孟洋 李娟 王智民 高慧敏)
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[关键词]绵枣儿；高异黄酮；二苯乙烯
绵枣儿Scilla scilloides (Lindl.) Druce为风信子科绵枣儿属多年生草本植物，在我国主要分布于东北、华北、华中以及四川(木里)、云南( 洱源、中甸)、广东(北部)、江西、江苏、浙江和台湾。生于海拔2 600米以下的山坡、草地、路旁或林缘，也分布于朝鲜、日本和苏联[1]。其鳞茎或带根的全草作为绵枣儿入药始载于《救荒本草》，又名石枣儿，天蒜，地兰，山大蒜，鲜白头，地枣、独叶芹、催生草、药狗蒜，老鸭葱等。《全国中草药汇编》和《中华本草》均描述绵枣儿味甘、苦，性寒，有小毒，具有活血止痛、解毒消肿、强心利尿的功效，用于跌打损伤，腰腿疼痛，筋骨痛，心脏病水肿；外用治痈疽，乳腺炎等[2，3]。已有研究表明绵枣儿含三萜及三萜皂苷、高异黄酮、生物碱和二苯乙烯等多种化学成分，生物活性具有多样性，主要表现在抗菌、抗炎、抗氧化等方面[4]。鉴于绵枣儿在我国分布范围广、资源丰富，药用历史悠久，在河南某些产区有食用和酿酒的习惯，而文献记载“绵枣儿有毒，应用不当会导致夹竹桃样中毒症状”[2]。因此，对绵枣儿开展深入的化学成分研究，对于阐明其药效物质基础，实现植物资源的有效开发与利用，保证临床用药安全具有重要意义。本研究采用各种柱色谱技术，从采自河南信阳的绵枣儿鳞茎95%乙醇提取物中分离出17个化合物；基于化合物的理化性质和波谱数据，鉴定了他们的结构；其中化合物3，4，6，9，13和15～17为首次从绵枣儿植物中分离得到。
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Bruker AVIII-600核磁共振仪，Alltech 426 UV 2000 高效液相色谱仪，岛津LC-20A高效液相色谱仪，Aglient 1200-6130 series LC/MSD 液质联用仪，SHZ-D循环水式真空泵，旋转蒸发仪。
柱色谱硅胶(100～200，200～300，300～400目，青岛海洋化工厂)，柱色谱用ODS填料(Merck，German)，薄层色谱硅胶GF254(青岛海洋化工厂)，预制薄层板GF254(烟台江友硅胶开发有限公司或青岛海洋化工厂)， Sephadex LH-20(GE Healthcare，Sweden)，HPD-100型大孔树脂(河北沧州宝恩化工有限公司)，Macherey-Nagel Nucleosil C18 HPLC半制备柱(10 mm×250 mm，5 μm)，氘代试剂DMSO，CD3OD和CDCl3(Cambridge Isotope Laboratories，USA)；显色剂2%硫酸香草醛溶液，色谱甲醇和乙腈(Fisher)，其他试剂均为分析纯(北京化工厂)。
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绵枣儿于2011年11月采自河南省信阳市浉河区五星乡龟山亭风景区，经河南中医学院药学院代丽萍副教授鉴定为绵枣儿属植物绵枣儿S. scilloides的鳞茎。
2 提取与分离
新鲜的绵枣儿鳞茎10 kg，洗净，捣碎，依次用95%，95%，70%和50%乙醇加热回流提取4次(10倍，10倍，8倍，6倍)，1 h/次，提取液纱布过滤，滤液回收溶剂，得95%，70%和50%乙醇提取物400 g，730 g和250 g。取95%乙醇提取物用适量水混悬，乙酸乙酯萃取，水层上HPD-100树脂柱，分别用水，30%，50%和95%乙醇(各3倍柱体积)进行洗脱，回收溶剂得各部位的浸膏分别为200 g，55 g，6 g和29 g。经初步的TLC和HPLC分析，乙酸乙酯萃取部位和大孔树脂柱95%乙醇洗脱部位主成分相似，将两者合并，共44 g，进行硅胶柱色谱分离，分别用石油醚-丙酮(4∶1，1∶1)、氯仿-甲醇(20∶1，9∶1，3∶1)、氯仿-甲醇-水(15∶8∶1，6∶4∶1)梯度洗脱，共得到15个流分(Fr.1～15)。Fr.3经Sephadex LH-20柱分离，甲醇洗脱，得到Fr.3.1～Fr.3.3共3个流分；Fr.3.3(250 mg)经半制备HPLC纯化，流动相为乙腈-0.3%乙酸水(40∶60，3 mL·min-1)，得到化合物1(97 mg，tR 21.8 min )和2(33 mg，tR 23.6 min)；Fr.3.2(136 mg)经半制备HPLC纯化，流动相为乙腈-0.3%乙酸水(40∶60，3 mL·min-1)，得到化合物3(30 mg，tR 19.9 min)和4(3 mg，tR 16.8 min)。Fr.4经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇(60∶1，30∶1，10∶1)洗脱，得到7个流分Fr.4.1-Fr.4.7； Fr.4.7(70 mg)经半制备HPLC纯化，流动相为乙腈-0.3%乙酸水(27∶73，3 mL·min-1)，得到化合物5(30 mg，tR 31.3 min)和6 (20 mg，tR 18.7 min)；Fr.4.2(780 mg)经Sephadex LH-20柱(甲醇洗脱)以及半制备HPLC纯化，流动相为甲醇-水(51∶49，3 mL·min-1)，得到化合物7(6 mg，tR 22.5 min)， 8(99 mg，tR 30.3 min)，9(20 mg，tR 39.6 min)，10(20 mg，tR 25.3 min)和17(10 mg，tR 18.9 min)；Fr.4.4(600 mg)经Sephadex LH-20柱(甲醇洗脱)以及半制备HPLC纯化，流动相为甲醇-水(52∶48，3 mL·min-1)，得到化合物11(18 mg，tR 11.3 min)，12(10 mg，tR 17.6 min)，13(24 mg，tR 24.2 min)和14(20 mg，tR 52.5 min)；Fr.4.1(230 mg)经Sephadex LH-20(甲醇洗脱)以及半制备HPLC纯化，流动相为乙腈-水(36∶64，3 mL·min-1)，得到化合物15(20 mg， tR 20.1 min)和16(22 mg， tR 21.1 min)。, 百拇医药(王延敏 樊孟洋 李娟 王智民 高慧敏)