灵芝DNA甲基转移酶(GlMET1)基因克隆及原核表达诱导分析(1)

http://www.100md.com 2016年3月15日 《中国中药杂志》2016年第6期

     [摘要]DNA甲基转移酶是DNA甲基化过程中最关键的酶，对生物体内的基因表达调节起着重要作用。研究根据灵芝转录组数据，通过全基因合成首次克隆得到灵芝DNA甲基转移酶GlMET1，Genbank注册号为KU239998，并对其基因特性和空间结构进行全面的生物信息学分析。原核表达诱导分析表明pET28a(+)GlMET1重组质粒在BL21(DE3)中能成功表达出目的蛋白，对其诱导条件进行优化，得出蛋白最合适的表达条件为：诱导温度为16 ℃，重组菌生长25 h(A600为08)，IPTG浓度为02 mmol·L-1，诱导时间为12 h。实时荧光定量PCR结果表明不同品种灵芝GlMET1的基因表达水平均有明显差异，且GlMET1在成熟期的表达水平均低于幼年期，说明GlMET1表达量随着灵芝的生长发育呈下降趋势。该研究结果为深入研究DNA甲基转移酶蛋白的作用机制奠定了基础。

    [关键词]灵芝；甲基化；甲基转移酶；基因克隆；原核表达

    表观遗传修饰是指不改变DNA序列的可遗传的对碱基和组蛋白的化学修饰，主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑以及非编码RNA等[1] ......