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编号:12986070
天然产物合成生物学关键技术(4)
http://www.100md.com 2016年11月15日 《中国中药杂志》2016年第22期
     Rac原噬菌体也可用于大片段DNA在大肠杆菌中组装。Rac原噬菌体的RecE/RecT重组系统功能上与噬菌体λ的Red蛋白重组酶系统类似(RecE 和RecT分别与Exo 和 Beta类似)[51]。研究显示噬菌体λ的Red蛋白重组酶系统适用于线性和环状DNA分子的结合,而Rac的RecE/RecT 系统更适用于2个线性DNA分子的连接[52]。

    2 底盘基因组的编辑技术

    采用基因组编辑技术几乎可以对任意基因进行编辑和修饰[8]。近年来,基因组范围的高效编辑技术发展迅速,对宿主基因组的改造效率也不断提升,能更加有效地解决宿主菌株改造中的许多瓶颈问题,例如:大片段基因组的改造、复杂表型的改造、基因组上多重位点的组合优化和不需抗生素进行辅助筛选的高效基因组修饰等[53]。此外,对宿主基因组进行适当精简,只保留存活所需的“必须基因”,能大大改善宿主细胞对底物、能量的利用效率[54]。

    2.1 ZFNs

    锌指核酸酶(zincfinger nucleases, ZFNs)是第一种通过人工改造并成功应用的核酸内切酶,由负责DNA特异识别的锌指蛋白 (zinc finger protein ......
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