消渴痹通胶囊对高糖诱导的RSC96雪旺细胞损伤的保护作用及其机制(2)
1 材料与方法1.1 材料
1.1.1 细胞株 所用的RSC96雪旺细胞购买于ATCC细胞库(批号:CRL-2765)。RSC96雪旺细胞复苏及培养:从液氮罐中快速取出RSC96细胞,37 ℃水浴快速解冻约1 min,将细胞悬浮液(1 mL)吸入15 mL离心管内并加入1 mL DMEM完全培养基,混匀后1 000 r/min离心5 min,弃上清液,加入5 mL含10%FBS、1%双抗、5 mmol/L葡萄糖的完全DMEM培养基;置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养。显微镜下观察复苏的RSC96细胞生长状态,当细胞生长状态良好且铺满T25培养瓶的90%时进行细胞传代。1~2 d换液1次,2~4 d传代。取对数生长期的RSC96细胞进行后续实验。
1.1.2 药物 消渴痹痛胶囊(黄芪30 g、桑枝10 g、威灵仙10 g、牛膝10 g、鸡血藤15 g、豨莶草15 g、全蝎3 g等)为本院院内制剂,取1.5 mL EP管,每个EP管分装消渴痹痛胶囊内容物50 mg,-20 ℃冰箱保存待用。
1.1.3 试剂与仪器
1.1.3.1 试剂 1640培养基购买于Hyclone公司;胎牛血清(FBS)购买于Gibco公司;MTT检测试剂盒购买于美国Amresco公司;二甲基亚砜(DMSO)和多聚左旋赖氨酸购买于Sigma公司;Anti-rabbit IgG、HRP-linked Antibody购买于CST公司;Anti-mouse IgG、HRP-linked Antibody购买于CST公司 ......
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