SurvivinsiRNA对卵巢癌细胞侵袭的影响(2)
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1.5测定SKOV3细胞的侵袭能力
制备NIH3T3条件培养液;用Matrigel包被基底膜；接种、培养细胞；固定及染色;每个样本计数10个400倍视野取其均值。
1.6统计学方法
用SPSS 13.0统计学软件进行分析。计量资料统计结果以(x±s)表示，3组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 Western blot 检测结果
干涉后检测到蛋白表达明显减弱，survivin-siRNA转染组与非特异性survivin-siRNA转染组、空白对照组的蛋白阳性表达率分别为(32.41±0.59)%、(57.49±0.37)%和(58.34±0.46)%。survivin-siRNA组与其他组相比，差异有统计学意义(P<0.05)。survivin蛋白表达在对照组与非特异性组之间无差异(P>0.05)，见图1、2。
C：空白对照组；N：非特异性siRNA转染组；S：survivin-siRNA转染组
2.2 细胞侵袭实验
通过检查细胞穿过Matrigel的能力反映出该细胞的侵袭能力。空白对照组侵袭细胞的相对数目为16.63±1.28，非特异性survivin-siRNA转染组的相对数目为15.83±1.23，survivin-siRNA转染组侵袭细胞的相对数目为4.26±0.91，见图3。经F检验得出特异性survivin-siRNA转染组侵袭至滤膜下面的细胞数低于其他组，差异有统计学意义(P<0.001)，表明经特异性survivin干涉后明显降低了细胞的侵袭能力。
3讨论
细胞凋亡抑制因子(inhibitor of apoptosis，IAP)家族是结构上具有1个或多个高度保守的约70个氨基酸重复序列的一类抗凋亡蛋白，普遍存在于病毒和哺乳动物细胞等生物中[3]。1997年Ambrosini 等在人类基因文库中进行筛选，克隆出survivin基因，可以选择性地表达于肿瘤组织，并具有抑制细胞凋亡的作用[4-6]。RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术是最近用于研究基因功能和基因治疗等方面的新技术，具有抑制作用强、稳定性高等优点[7]。本研究采用RNA干扰体外转录体系，合成针对特异性的survivin-siRNA，由脂质体介导转入卵巢癌SKOV3细胞中，运用Western blot的方法检测到在转染特异性的siRNA后survivin蛋白的表达降低，在转染非特异性的siRNA及未转染的细胞中survivin 蛋白未见改变。表明设计的特异性survivin-siRNA可以特异性的干涉肿瘤细胞中survivin基因的表达，这为后续研究survivin基因的功能提供了前提。survivin在肿瘤细胞中有特异性表达，而用RNAi技术可以明显抑制目的基因的表达，这就为肿瘤的基因治疗提供了极为有利的条件[8-9]。
侵袭和转移是恶性肿瘤的重要特征，已有研究表明survivin的表达与组织病理分级、临床分期密切相关[10]。 Yamamoto TR 等[11]的研究表明，survivin在结直肠癌和乳腺癌的转移淋巴结中的表达率，分别为77%和86%，而且在HE染色没有显示的微转移病变中survivin为阳性表达。提示survivin的表达可能与肿瘤细胞的侵袭与转移有关。笔者通过对抑制survivin表达的SKOV3细胞的侵袭力实验发现，实验组细胞的侵袭力明显低于对照组，说明阻断survivin的表达降低了SKOV3的侵袭力。提示survivin可能参与了肿瘤细胞侵袭力的调节，具体机制尚不清楚。
RNAi的发现改变了人们对细胞基因调控的传统理解,提供了特异性阻断基因表达、评价基因功能的新策略。siRNA是RNAi作用中不可缺少的重要环节，这一发现进一步揭示了RNAi的作用机制。高效特异性的SiRNA干涉作用为哺乳动物细胞的基因治疗开创了新的道路。
[参考文献]
[1]Marc F,Hansen.Molecular genetic consideration in osteosarcoma[J].Clin orthop,1991,270(5):273-281.
[2]Vermeulen K, Bememan ZN, Van Bockstaele DR. Cell cycle and apoptosis[J].Cell Prolif,2003,36(9):165-175.
[3]Tamm I, Wang Y, Sausville E, et al. IAP-family protein survivin inhibits caspase activity and apoptosis induced by Fas(CD95), Bax, caspase, and anticancer drugs[J].Cancer Res 1998,58(2):5315-5320.
[4]Ambrosini Q,Adida C, Altieri DC. A novel anti-apoptosis gene,survivin, expressed in cancer and lymphoma[J].Nat Med,1997,3(8):917-921.
[5]Shao Y,Liu Y,Shao C,et al ......
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