保健酒中总黄酮的含量测定
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[摘要] 目的 建立测定保健酒中总黄酮含量的方法，并对6个样品进行测定。 方法 将样品进行处理后，用NaNO2、Al(NO3)3、NaOH显色，再采用可见分光光度法(检测波长为505 nm)测出吸光度，以芦丁为标准品绘制的标准曲线求出总黄酮含量。 结果 方法学考察中精密度、重现性、回收率良好，该方法在15～40 min内稳定，线性范围0～1.01 mg。 结论 该方法操作简单，高效稳定，适合本身有颜色的保健酒中总黄酮的含量测定。
[关键词] 保健酒；黄酮；含量测定；分光光度法
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)03(c)-0054-02
黄酮类化合物分子中有游离的3-OH、5-OH或邻二酚羟基时可与Al3+、Zr4+、Pb2+等形成配合物显色，此性质可用于黄酮类化合物的定性、定量分析[1]。本文以亚硝酸钠-硝酸铝显色，采用此法测定保健酒中总黄酮的含量。
1 仪器与试剂
1.1仪器
U-3010可见紫外分光光度计(日立)；比色皿(1 cm)。
1.2 试剂
芦丁标准品(100080-200707，中国药品生物制品检定所)，NaNO2(分析纯，天津科盟化工)；Al(NO3)3(分析纯，天津科斯夫化工)；NaOH(分析纯，天津广成)；甲醇(分析纯，山东禹王)，保健酒样品(张裕集团提供)。
1.3 试剂配制
1.3.1 5% NaNO2的配制
精密称取NaNO2 2.5 g，蒸馏水溶解并定容至50 mL，临用现配。
1.3.2 10% Al(NO3)3的配制
精密称取Al(NO3)3 5 g，蒸馏水溶解并定容至50 mL，临用现配。
1.3.3 4% NaOH的配制
精密称取NaOH 4 g，蒸馏水溶解并定容至100 mL。
1.3.4 75%甲醇配制
将蒸馏水与甲醇按1∶3的比例混合，即得。
2 方法与结果
2.1标准曲线的制备
精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品10.1 mg，用75%的甲醇溶解并定容至50 mL。精密吸取0、1、2、3、4、5 mL，分别置于10 mL容量瓶中，各加入甲醇至5 mL，分别加入5%亚硝酸钠0.5 mL，摇匀，放置6 min，加入10%硝酸铝0.5 mL，摇匀，放置6 min，加入4%氢氧化钠4 mL，再加甲醇至10 mL，放置20 min，置比色皿中于400～600 nm之间测定吸收谱，确定最大吸收波长为505 nm，在505 nm处测定吸光度，作标准曲线，得回归方程y = 0.896 5x - 0.002 4，r =0.999 9。表明芦丁含量在0～1.01 mg范围内与吸光度的线性关系良好[2-7]。
2.2 样品的测定
2.2.1 样品处理方法
2.2.1.1 灵芝酒 将灵芝酒样品摇匀精密吸取5 mL置于蒸发皿中，90℃水浴蒸干，75%甲醇溶解，过滤并定容至10 mL，取1 mL显色。
2.2.1.2 特质三鞭酒 将特质三鞭酒样品摇匀精密吸取5 mL置于蒸发皿中，90℃水浴蒸干，75%甲醇溶解，过滤并定容至5 mL，取2 mL显色。
2.2.1.3 金鸡铁树酒 将金鸡铁树酒样品摇匀精密吸取5 mL置于蒸发皿中，90℃水浴蒸干，75%甲醇溶解，过滤并定容至5 mL，取2 mL显色。
每批样品均平行测定3次。
2.2.2 统计学处理
采用SPSS 11.0软件进行处理，计量资料采用t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2.2.3 测定结果
测定结果见表1。
2.3 方法学考察与结果
2.3.1 空白的选择
因为样品有很深的颜色，本试验选用样品加碱[8]作空白。
2.3.2 稳定性试验
显色后15～40 min稳定，在15、20、25、30、35、40 min，测定吸光度分别为0.385、0.385、0.384、0.385、0.385、0.386、0.383， RSD为0.27%。
2.3.3 重现性试验
用上述方法对样品平行测定6次，结果分别为0.686、0.678、0.694、0.694、0.688、0.690，RSD为0.87%。
2.3.4 加样回收试验
取1 mL样品5份置于蒸发皿中，加入3 mL标准液(0.22 mg/mL)，蒸干，75%甲醇溶解并过滤定容至5 mL。结果见表2。
3 讨论
黄酮类物质是重要的天然保健成分，目前市场上大多数保健酒的主要药效组分是黄酮类成分，因为保健酒都有很深的颜色 ......
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