3讨论

    环状定点突变技术多用于单碱基突变，酶切位点修改和片段删除报道较少。本研究扩展了该技术在生物医药领域的应用范围：①抗体药物Fc结构N297A，L235E和 M428L/N434S等突变改善抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)[14];②去除药物研发筛选技术(单B细胞筛选技术[15])的冗余酶切位点，加快药物研发进程;③去除药物开发早期目标蛋白携带的His6、HA或GFP等标签[16]，促进药物研发早期活性评价。本研究环状定点诱变技术删除的PelB信号肽长度仅为63 bp，理论可以实现更长片段的删除(笔者在XTEN融合蛋白技术研究中成功删除1728 bp的片段);此外，技术可以实现连续1～6个碱基的任意突变，理论可以实现更长碱基对发突变(限制因素为引物合成长度)，下一步研究拟证明该技術的最长突变极限。

    本研究验证了环状定点突变技术在单碱基突变中应用的可行性 ......