益肺散结颗粒肿瘤免疫作用的实验研究
【关键词】益肺散结颗粒； 瘤细胞株； 免疫作用
中图分类号 R73.3文献标识码 B文章编号 1674—6805(2012)27—0148—02
益肺散结颗粒由无花果、木蝴蝶、白人参、灵芝、清半夏等十多味中药组成，具有清肺益气、止咳化痰、散结止血的作用，临床作为肺癌的辅助治疗药，主要用于气阴两虚、痰毒积肺肺癌患者及减轻放疗、化疗的不良反应。本文对其肿瘤免疫作用进行实验研究，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 一般材料
1.1.1 药物与试剂 益肺散结颗粒：由湖南省中医药研究院中药研究所制剂研究室提供，浸膏，1.72 g生药/g，批号：20061128。参莲胶囊：阳性对照药，中国吉林通化金马药业股份有限公司生产，批号：20060402。伊文思蓝：上海化学试剂采购供应站试剂厂生产(进口分装)，批号：20030320。Giemsa染色素：上海试剂三厂生产，批号：20040121。Wright’s染色素：上海试剂三厂生产，批号：200040125。
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1.1.2 动物 C57BL/6J清洁级小鼠：体重18～22 g，雌雄兼用，由上海西普尔必凯实验动物有限公司提供，合格证号：沪动合证字153号。
1.1.3 瘤细胞株 小鼠Lewis肺癌均由中国医学科学院药物研究所提供，两周传代1次。
1.2 方法
每次实验取C57BL/6J雄性小鼠50只，体重18～22 g，按无菌操作于右腋皮下接种小鼠Lewis肺癌和生理盐水(1∶4)无菌稀释液0.2 ml/只，24 h后称重，随机分为5组：荷瘤对照组、益肺散结颗粒23.92、11.96、5.98 g/kg组(分别称为高、中、低益肺散结组)和参莲胶囊1.17 g/kg组，每组10只，另取正常动物10只接种等量生理盐水作为正常对照组。
1.2.1 对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能影响的实验 分组当日对荷瘤小鼠进行上述方法给药，1次/d，连续8 d，对照组给予等体积蒸馏水。末次给药后1 h，各鼠ip 5%鸡红细胞生理盐水混悬液0.5 ml，5 h后处死，腹腔注射生理盐水2 ml，转动鼠体1 min，然后抽取腹腔洗液，分滴于两片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒中，于37 ℃温育30 min，取出玻片，于生理盐水中漂洗，晾干后1∶1丙酮—甲醇液固定5 min，用4%(v/v)Giemsa—Wright’s染液染色3 min，蒸馏水漂洗，晾干，油镜下观察，按公式计算吞噬百分率和吞噬指数[1—2]。
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1.2.2 对荷瘤小鼠溶血素形成影响的实验 分组当日对荷瘤小鼠进行上述方法给药，1次/d，连续8 d，对照组给予等体积蒸馏水。给药当天每鼠ip 5%鸡红细胞生理盐水混悬液0.2 ml，第8天末次给药后1 h，摘眼球取血，离心取血清用生理盐水稀释100倍，取稀释血清1 ml，与5%鸡红细胞混悬液0.5 ml、10%补体0.5 ml混合，于37 ℃恒温箱中保温30 min后，0 ℃冰箱中中止反应。离心取上清液，用7230型分光光度计于540 nm处比色，以不加血清的空白对照管调零，测定各管光密度OD值，以OD读数作为判定血清溶血素的指标[1]。
1.2.3 对荷瘤小鼠DNCB迟发型皮肤过敏反应影响的实验 分组当日对荷瘤小鼠进行上述方法给药，1次/d，连续10 d，对照组给予等体积蒸馏水。给药当天各鼠预先用8%Na2S脱毛，颈部皮肤上滴以50% DNCB丙酮溶液2 μl/只，第10天末次给药后1 h于预先脱毛的腹部皮肤上涂2.5% DNCB丙酮溶液20 μl/只进行攻击。24 h后，各鼠尾静脉注射1%伊文思蓝10 ml/kg，30 min后处死小鼠，取下腹部蓝染皮肤，剪碎置试管中，用1∶1丙酮生理盐水混合液4 ml浸泡24 h后，离心取上清液，以蒸馏水调零，用7230型分光光度计于610 nm处测光密度OD值[2]。
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2 结果
2.1 对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
荷瘤对照组吞噬百分率和吞噬指数比正常对照组低，高益肺散结组OD值明显高于荷瘤对照组，益肺散结颗粒23.92 g/kg能明显提高荷瘤小鼠吞噬百分率和吞噬指数，显著提高其吞噬细胞功能，增强小鼠机体免疫功能。详见表1。
2.2 对荷肺癌小鼠溶血素形成的影响
荷瘤对照组OD值明显低于正常对照组，高、中益肺散结组OD值明显高于荷瘤对照组，益肺散结颗粒23.92、11.96 g/kg和参莲胶囊能明显提高荷瘤小鼠OD值，促进溶血素形成，提高机体体液免疫功能，详见表2。
2.3 对荷瘤小鼠DNCB迟发型皮肤过敏反应的影响
荷瘤对照组皮肤反应OD值明显低于正常对照组，其迟发型过敏反应受到抑制，高、中益肺散结组皮肤反应OD值明显高于荷瘤对照组，益肺散结颗粒23.92、11.96 g/kg和参莲胶囊能明显提高荷瘤小鼠皮肤反应OD值，对荷瘤小鼠T细胞免疫功能具有明显的促进作用。详见表3。
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3 讨论
益肺散结颗粒主要功能为清肺益气、止咳化痰、散结止血，临床上作为肺癌的辅助治疗药。药理实验结果表明：能提高荷瘤小鼠吞噬百分率和吞噬指数，增强吞噬细胞功能；明显促进溶血素形成，提高机体体液免疫功能；能提高荷瘤小鼠皮肤反应OD值，对荷瘤小鼠T细胞免疫功能具有明显促进作用。
参考文献
[1]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社，1991：158—160.
[2]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1993：315—317，747.
(收稿日期：2012—07—14) (编辑：田烨), http://www.100md.com(刘丽沙 首弟武)
中图分类号 R73.3文献标识码 B文章编号 1674—6805(2012)27—0148—02
益肺散结颗粒由无花果、木蝴蝶、白人参、灵芝、清半夏等十多味中药组成，具有清肺益气、止咳化痰、散结止血的作用，临床作为肺癌的辅助治疗药，主要用于气阴两虚、痰毒积肺肺癌患者及减轻放疗、化疗的不良反应。本文对其肿瘤免疫作用进行实验研究，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 一般材料
1.1.1 药物与试剂 益肺散结颗粒：由湖南省中医药研究院中药研究所制剂研究室提供，浸膏，1.72 g生药/g，批号：20061128。参莲胶囊：阳性对照药，中国吉林通化金马药业股份有限公司生产，批号：20060402。伊文思蓝：上海化学试剂采购供应站试剂厂生产(进口分装)，批号：20030320。Giemsa染色素：上海试剂三厂生产，批号：20040121。Wright’s染色素：上海试剂三厂生产，批号：200040125。
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1.1.2 动物 C57BL/6J清洁级小鼠：体重18～22 g，雌雄兼用，由上海西普尔必凯实验动物有限公司提供，合格证号：沪动合证字153号。
1.1.3 瘤细胞株 小鼠Lewis肺癌均由中国医学科学院药物研究所提供，两周传代1次。
1.2 方法
每次实验取C57BL/6J雄性小鼠50只，体重18～22 g，按无菌操作于右腋皮下接种小鼠Lewis肺癌和生理盐水(1∶4)无菌稀释液0.2 ml/只，24 h后称重，随机分为5组：荷瘤对照组、益肺散结颗粒23.92、11.96、5.98 g/kg组(分别称为高、中、低益肺散结组)和参莲胶囊1.17 g/kg组，每组10只，另取正常动物10只接种等量生理盐水作为正常对照组。
1.2.1 对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能影响的实验 分组当日对荷瘤小鼠进行上述方法给药，1次/d，连续8 d，对照组给予等体积蒸馏水。末次给药后1 h，各鼠ip 5%鸡红细胞生理盐水混悬液0.5 ml，5 h后处死，腹腔注射生理盐水2 ml，转动鼠体1 min，然后抽取腹腔洗液，分滴于两片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒中，于37 ℃温育30 min，取出玻片，于生理盐水中漂洗，晾干后1∶1丙酮—甲醇液固定5 min，用4%(v/v)Giemsa—Wright’s染液染色3 min，蒸馏水漂洗，晾干，油镜下观察，按公式计算吞噬百分率和吞噬指数[1—2]。
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1.2.2 对荷瘤小鼠溶血素形成影响的实验 分组当日对荷瘤小鼠进行上述方法给药，1次/d，连续8 d，对照组给予等体积蒸馏水。给药当天每鼠ip 5%鸡红细胞生理盐水混悬液0.2 ml，第8天末次给药后1 h，摘眼球取血，离心取血清用生理盐水稀释100倍，取稀释血清1 ml，与5%鸡红细胞混悬液0.5 ml、10%补体0.5 ml混合，于37 ℃恒温箱中保温30 min后，0 ℃冰箱中中止反应。离心取上清液，用7230型分光光度计于540 nm处比色，以不加血清的空白对照管调零，测定各管光密度OD值，以OD读数作为判定血清溶血素的指标[1]。
1.2.3 对荷瘤小鼠DNCB迟发型皮肤过敏反应影响的实验 分组当日对荷瘤小鼠进行上述方法给药，1次/d，连续10 d，对照组给予等体积蒸馏水。给药当天各鼠预先用8%Na2S脱毛，颈部皮肤上滴以50% DNCB丙酮溶液2 μl/只，第10天末次给药后1 h于预先脱毛的腹部皮肤上涂2.5% DNCB丙酮溶液20 μl/只进行攻击。24 h后，各鼠尾静脉注射1%伊文思蓝10 ml/kg，30 min后处死小鼠，取下腹部蓝染皮肤，剪碎置试管中，用1∶1丙酮生理盐水混合液4 ml浸泡24 h后，离心取上清液，以蒸馏水调零，用7230型分光光度计于610 nm处测光密度OD值[2]。
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2 结果
2.1 对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
荷瘤对照组吞噬百分率和吞噬指数比正常对照组低，高益肺散结组OD值明显高于荷瘤对照组，益肺散结颗粒23.92 g/kg能明显提高荷瘤小鼠吞噬百分率和吞噬指数，显著提高其吞噬细胞功能，增强小鼠机体免疫功能。详见表1。
2.2 对荷肺癌小鼠溶血素形成的影响
荷瘤对照组OD值明显低于正常对照组，高、中益肺散结组OD值明显高于荷瘤对照组，益肺散结颗粒23.92、11.96 g/kg和参莲胶囊能明显提高荷瘤小鼠OD值，促进溶血素形成，提高机体体液免疫功能，详见表2。
2.3 对荷瘤小鼠DNCB迟发型皮肤过敏反应的影响
荷瘤对照组皮肤反应OD值明显低于正常对照组，其迟发型过敏反应受到抑制，高、中益肺散结组皮肤反应OD值明显高于荷瘤对照组，益肺散结颗粒23.92、11.96 g/kg和参莲胶囊能明显提高荷瘤小鼠皮肤反应OD值，对荷瘤小鼠T细胞免疫功能具有明显的促进作用。详见表3。
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3 讨论
益肺散结颗粒主要功能为清肺益气、止咳化痰、散结止血，临床上作为肺癌的辅助治疗药。药理实验结果表明：能提高荷瘤小鼠吞噬百分率和吞噬指数，增强吞噬细胞功能；明显促进溶血素形成，提高机体体液免疫功能；能提高荷瘤小鼠皮肤反应OD值，对荷瘤小鼠T细胞免疫功能具有明显促进作用。
参考文献
[1]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社，1991：158—160.
[2]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1993：315—317，747.
(收稿日期：2012—07—14) (编辑：田烨), http://www.100md.com(刘丽沙 首弟武)