超声波法与酶解法联合制备短刺小克银汉霉原生质体及其活性评价(2)
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参见附件。
2.5 原生质体酶解过程形态
3 讨论
超声波细胞破碎仪是利用一种超声波在液体中产生空化效应的多功能、多用途的仪器，它能用于各种动植物细胞、病毒细胞、细菌及组织的破碎。本文采用蜗牛酶酶解法和超声波细胞破碎仪机械法联合运用制备原生质体，这与Xiong等[9]用单酶解法报道相比要高出14倍，这是没有报道过的。笔者推测其中的原因是虽然蜗牛酶在作用长达4 h后可得到大量小克银汉霉原生质体，但是不可回避的问题是蜗牛酶在降解细胞壁时，对原生质体活性有严重的损害，同时大量的具有代谢和转化药物的酶也同时有可能被降解，这可能是造成药物转化率低的主要原因。本文联合运用超声波细胞破碎仪机械法将蜗牛酶解4 h缩短到2 h，提高了原生质体的活性，且原生质体在7 d内的存活率达90%以上。由此推测联合使用蜗牛酶法和超声波细胞破碎仪机械法可使原生质体的活性提高，这是一种很有效的制备原生质体的方法。
现在检测原生质体活性方法主要是通过原生质体的再生率进行评估，这种方法需要将原生质体恢复成菌丝体，非常复杂耗时[10]。Rotman等[11]提出的FDA染色法是一种简单快速检测方法，FDA可以直接与活性原生质体的酯酶结合发出荧光后即可检测，而不用菌丝体，节省了大量的检测时间。虽然FDA广泛运用于植物原生质体的活性检测 ......
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