p35和EBI3mRNA在结肠癌组织中的表达及意义(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
1 材料与方法
1.1 一般资料
收集2012年5月～2013年5月东莞市太平人民医院肝肠外科手术切除的结肠癌组织及相对应癌旁(距离癌组织4cm以外)组织标本30例，其中男17例，女13例，年龄31～66岁，平均45.3岁。所有患者经本院病理科确诊后，依世界卫生组织(WHO)分类法进行临床病理特征分类。组织学分型：高分化癌8例、中分化癌6例、低分化癌8例、未分化癌8例。Dukes分期：A期8例、B期9例、C期11例、D期2例。所有患者均为新发病例在行手术前均未进行过放疗或化疗。此外，选取同期正常结肠组织20例，其中男11例，女9例，年龄30～62岁，平均年龄44.7岁，作为对照组。术后所有组织标本即刻剪成适量大小置于液氮中保存备用。
1.2 主要试剂与仪器
Trizol试剂、RT-PCR试剂盒、DNA marker均为TaKaRa大连公司产品；人p35、EBI3和β-actin引物由上海生工公司合成；PCR仪和ChemiDox XRS凝胶成像系统购自于美国Bio-RAD公司。
1.3 实验方法
1.3.1 RNA提取 将置于液氮中的组织标本迅速取出于组织研磨器中快速研碎后，加入1mL Trizol，反复抽吸吹打裂解细胞后，转移至1.5mL 灭酶EP管中，室温放置10min，加入200μL氯仿剧烈振荡15s，室温放置5min，4℃，12000rpm离心15min，吸上清至另一1.5mL灭酶EP管中；加入等体积异丙醇混匀，上下混匀30s，室温放置10min，4℃，12000rpm离心10min，弃上清，用75%乙醇洗两次，振荡器震荡30s，4℃，7500rpm离心5min；弃上清，真空干燥10min，沉淀溶于50μLDEPC水中，56℃水浴助溶10min。吸取5μL 提取的RNA，加95μL DEPC水稀释后用紫外分光光度计检测OD260及OD260/OD280值，OD260/OD280值在1.8～2.0之间，表示RNA纯度高，RNA浓度按下式计算：浓度(μg/mL)=OD260×稀释倍数×40，定量后，经逆转录反应合成cDNA。
1.3.2 RT-PCR p35基因上游引物：5’-CTTCAATCTAGGCGAGGCGA-3’ ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。